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QIAGEN PCR Cloning Kit (40)

货  号:231124

产品规格:40

原  产  地:德国

参考价格:4410 (参考价格,以实际价格为准)

优惠价格:

产品详细信息

QIAGEN PCR Cloning Kit (40)

231124

直接克隆Taq DNA聚合酶产生的PCR产物

  • 从PCR产物到涂板只需40分钟
  • 易用的连接酶预混液
  • 高特异性UA连接和高效克隆
  • 转化细胞可立刻涂板

QIAGEN PCR Cloning Kit提供即用型连接反应,包括3'端含有U突出末端的线性克隆载体,可直接进行高效、快速的连接和克隆。

原理

pDrive Cloning Vector(参见pDrive Cloning Vector)通过UA杂交可对PCR产物进行高效克隆。载体是3'端带有U突出末端的线性形式,能与Taq和 其他非高保真DNA聚合酶产生的带有A突出末端的PCR产物进行高特异性杂交。pDrive Cloning Vector具有很多有用的特征,便于对克隆的PCR产物进行分析。这些特征包括多种独特的限制性酶切识别位点、通用测序引物位点和用于体外转录的启动 子。此外,载体还可进行氨苄青霉素和卡那霉素筛选,以及对重组克隆的蓝/白斑筛选。

PCR产物可高效克隆到pDrive Cloning Vector,与基于TA的克隆载体相比,所需时间更少。而且,T是最可能与非互补碱基(如G、C和T)杂交的碱基,带有T突出末端的载体更可能发生自连 或连接克隆引物或退火引物,导致假阳性克隆数目增加。相比而言,pDrive Cloning Vector具有更高的克隆效率,表明U对非特异性碱基配对有更低的容忍度。

Ligation Master Mix采用预混形式,专用于为高效克隆提供最佳的杂交环境。

QIAGEN PCR Cloning Kit的组成
成分 包含 浓度
pDrive Cloning Vector 50 ng/µl
Ligation Master Mix 2x solution
Distilled water
QIAGEN EZ Competent Cells
SOC medium

操作流程

 直接将PCR产物和pDrive Cloning Vector及Ligation Master Mix简单混合,再将连接反应液加入到感受态细胞中进行转化。

与拓扑异构酶法、TA法、常规粘性末端和平末端克隆方法相比,QIAGEN PCR Cloning Kit操作流程更加快速。连接需要30分钟,使用QIAGEN EZ Competent Cells进行转化和涂板只需10分钟,从PCR产物到涂板的整个操作流程只需40分钟。

应用
QIAGEN PCR Cloning Kit适用于克隆任何3'端带有单独A突出末端的PCR产物。使用Taq和 其他非高保真DNA聚合酶产生的PCR产物无需任何制备,可直接进行克隆。提供高保真DNA聚合酶的试剂盒,如HotStar HiFidelity Polymerase Kit和QIAGEN LongRange PCR Kit,可产生带有A突出末端的PCR产物,非常适合直接与QIAGEN PCR Cloning Kit配合使用。

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