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RPMI1640干粉培养基配制培养液(2000ml)

发布日期:2019/5/24

RPMI1640干粉培养基配制培养液(2000ml)

基础培养液的配制(2000ml) RPMI1640 基础培养液的配制(2000ml)
一、材料 1、 2500ml 广口立瓶(先用 1%稀盐酸溶液浸泡 12 小时,自来水中加洗涤剂用毛刷仔 细洗净内部, 用自来水冲洗干净 (加满水倒空达 10 次以上) 最后用重蒸水浸洗 2~3 , 次。然后干烤灭菌(170C,4 小时) 。 2、 双馏水。临用前 3 天内准备,使用石英双馏纯水器制备,上样水为科技处制备的纯 净水。蒸出后收集到 1 万 ml 立瓶中(干净且灭菌者) ,加塞密封。用电导仪测电阻 率需在 1.5×10E6Ω·cm 左右,最低不能低于 1.0×10E6Ω·cm。 (电导率为 1.0μ S/cm 以下) 。 3、 2000ml 量筒(洗净、干烤) 。 4、 RPMI1640 培养基干粉,4000mg NaHCO3。 5、 5ml 枪(枪头需高压灭菌) 。 6、 1N NaOH 或 1N HCl 各 400ml(16g NaOH 溶于蒸馏水中至总体 400ml,0.22u 一 次性滤器过滤除菌;34ml 浓盐酸溶于蒸馏水中至总体 400ml,0.22u 一次性滤器过 滤除菌) 。 7、 电子天平,灭菌的称量用纸和灭菌的药匙。 8、 1000ml 一次性滤器。 9、 500ml 或 250ml 玻瓶(泡酸、洗净、干烤。瓶塞高压) 。 10、 25ml 小烧杯。 11、 酸度计(2 个) 。 12、 电导仪。 13、 渗透压仪。 14、 内毒素测定试剂盒。 15、 15ml 无菌离心管。 16、 CO2 培养箱。 17、 记号笔。 二、方法(在无菌室内操作) 1、 取配培养液专用的 2500ml 广口立瓶,加入在室温保存的 3 天内新蒸馏的双馏水 1800ml。 2、 加入 2 袋 RPMI1640 干粉培养基,轻轻振摇使之分散。不要加热。 3、 用 5ml 枪(枪头需高压灭菌)吸取蒸馏水冲洗包装袋内部,转移全部的痕量干粉到 容器内。 4、 精确称取 4000mg NaHCO3 加到容器中。 5、 加双蒸水至总体积为 1950ml,振摇使溶质充分溶解。 6、 用 5ml 枪(枪头需高压灭菌)取小样测溶液 pH 值。 7、 用已过滤除菌的 1N NaOH 或 1N HCl 调节 pH 值至 7.1±0.1。注意缓慢滴加,边 滴加边振摇。 8、 用双蒸水补足体积至 2000ml。 9、 用 1000ml 一次性滤器过滤除菌,分装到 500 或 250ml 瓶中,注意不要超过瓶体积 的 2/3。 10、 用 5ml 枪(枪头需高压灭菌)取小样测溶液 pH 值、电导、渗透压(渗透压应 为 290±3mOsm/kgH2O,否则应予调整),记录。

11、 用 5ml 枪(枪头需高压灭菌)取小样测溶液内毒素含量,记录。 12、 用 5ml 枪(枪头需高压灭菌)取小样到 15ml 离心管中,放入 CO2 培养箱中培 养 72 小时,确定有无细菌污染。 13、 用记号笔在瓶壁上标明培养基名称,批号(Lot No.)配制日期、操作者姓名。

细胞培养基使用注意事项
1、 因 RPMI1640 中含有的谷氨酰胺半衰期短,只有 1~3 周,故新配制的培养基使用 2 周后,再使用时,应临时补加谷氨酰胺。补加办法: 1) 100 倍浓缩的谷氨酰胺液使用时加入培养液总体积的 1/100。 2) 100 倍浓缩谷氨酰胺溶液(200mmol/L)的配制:2.9222g 谷氨酰胺,加双馏水 至 100ml,充分搅拌溶解后,过滤除菌。分装小青瓶(每瓶 5~10ml) 。-20C 贮 存。 2、 放入 CO2 培养箱中的培养瓶,务必将瓶盖旋松(只搭上 1 扣即可) ,以使 CO2 气体 能够进入培养瓶中。

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