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RPMI 1640细胞培养液的配制

发布日期:2019/5/24

RPMI 1640 细胞培养液的配制

1) 配制培养基最好使用新制备的三蒸水。一般在试验前当天或前一天制备为好。调节 pH 值的酸碱溶液也应该使用这种水配制。 2) 制备培养基的器皿清洗要绝对干净,烤干后备用(滤器、滤膜、量筒、移液管及盛放培 养基的小瓶等存放和转移培养基液体的器具都应进行灭菌) 。 3) 溶解培养基:将干粉培养基溶于总量 1/3 的水中,再用水洗包装袋内面两次,倒入培养 液中。振荡或超声助溶,一般不要加热助溶。 4) 补加试剂: 根据包装袋说明和试验需要加入 NaHCO3 2.0g) 谷氨酰胺、 ( 、 丙酮酸钠、 HEPES 等其他试剂。 5) 加抗生素:一般抗生素终浓度为――青霉素 100U/ml,链霉素 100U/ml。市售青霉素为 80 万 U/瓶,可溶于 4ml 体积,每一升培养液中加 0.5ml 即可。市售链霉素为 100 万 U/ 瓶,可溶于 5ml 体积,每一升培养液中也加 0.5ml 即可。无链霉素的情况下,用庆大霉素代 替,终浓度调为 50~200U/ml。 6) 调 pH 值:加水到 900ml(在需要加 10%小牛血清的情况下) ,然后用 5% NaHCO3 调节 pH 到 7.2。 7) 过滤除菌:宜采用 0.45um 和 0.22um 滤膜各一张,上层为 0.45um,下层为 0.22um,以保 证过滤效果。注意滤膜正面(光面)朝上。过滤后分装于小瓶中(100 或 200ml) 。 8) 加小牛血清:根据培养基配制的量将小牛血清分装,冷冻保存(-20℃) 。临用前将加入 小牛血清(10%~20%)。

【注意事项】 每次配液时,需要的其他辅助性液体(Hanks,胰蛋白酶消化液,PBS,抗生素溶液等)也 可以同时配制,分别过滤。 市售小牛血清使用前多应该灭活(56℃,30min) ,以消除补体活性。动物血清个体差异大, 故而每一批血清都进行严格检测,同时进行无菌试验。优质血清应该为淡黄色,透明,无溶 血,无沉淀,灭活后颜色稍深。生化检测总蛋白含量 3.5~4.5g/100ml,球蛋白不高于 2g/ 100ml。选定一个效果较好的批号后,可一次多购该批号的血清,保证试验条件的稳定。 由于市售小牛血清 pH 未知,但大多偏酸。试验中加入小牛血清后,培养基的 pH 可能还会 变化,故亦可先加入小牛血清后调 pH 值。但此种方法过滤较困难,只适于正压过滤。 培养液配好后,应先抽取少许放入培养瓶内,于 37℃温箱内置 24~48hr,以检测培养液是

否有污染。 每次配液量以两周左右为宜,一次配液不要太多,防止营养成分(主要为谷氨酰胺)损失, 造成实验繁琐或者污染。
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